您的位置: 首页>>技术中心>>

蛋白质的浓缩方法



蛋白浓缩方法基本有:


1. 透析袋浓缩法
利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子 (6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即 可。吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用。
主要用于更换蛋白质的缓冲液,有透析袋即可,不需要特殊的仪器。


2. 冷冻干燥浓缩法
这是浓缩蛋白质的一种较好的办法,它既使蛋白质不易变性,又保持蛋白质中固有的成分。它是在冰冻状态下直接升华去除水分。具体做法是将蛋白液在低温下 冰冻,然后移置干燥器内(干燥器内装有干燥剂,如NaOH、CaCl2和硅胶等)。密闭,迅速抽空,并维持在抽空状态。数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉 末。干燥后的蛋白质保存方便,应用时可配成任意浓度使用。也可采用冻干机进行冷冻干燥。
在冷冻状态下让扬品种的液体升华


3. 吹干浓缩法
将蛋白溶液装入透析袋内,放在电风扇下吹。此法简单,但速度慢,且温度不能过高,最好不要超过15℃。


4. 超滤膜浓缩法
此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出,而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的。有两种方法进行浓缩:一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内,在不断搅拌之下过滤;另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上,负压抽气,而使袋内液体渗出。
主要针对小体积蛋白质溶液(几ml)此法更不易引起变性,不过得有浓缩器,不是哪个实验室都有的。


5. 凝胶浓缩法
选用孔径较小的凝胶,如SephadexG25或G50,将凝胶直接加入蛋白溶液中。根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内,凝胶粒子吸水后,通过离心除去。


6. 浓缩胶浓缩法
浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、 无机盐等,适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后,蛋白质的回收率可达80%~90%。比凝胶应用方便,直接加入被浓缩的溶液中即可。必须注意,浓缩溶液的pH 值应大于被浓缩物质的等电点,否则在浓缩胶表面产生阳离子交换,影响浓缩物质的回收率。


7. 丙酮沉淀法:
试验要求的仪器简单,但是常常导致蛋白质变性。


8. 免疫沉淀法:
通过免疫沉淀法,用蛋白质特异性能够定量能够分离目的蛋白。有三个步骤组成:首先将特异性抗体加入细胞提取物,第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌, 以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质A和抗体形成复合物,蛋白质A与免疫球蛋白的Fc部分有高度的亲和性。或者说,纯化的蛋白A结合 Sephrarose树脂,为从细胞提取物中分离出抗原抗体复合物,提供一个固体基质。最后通过洗脱,除去尚未沉淀的杂质。
为了除去已破碎的或固定差的细胞,在用于免疫沉淀(作用)之前可以与纤细地金黄色葡萄球菌细胞,如果要用蛋白质ASephrarose树脂,参考厂家说明书。


9. 硫酸铵沉淀法:
利用高浓度盐将蛋白质析出(盐析),选择硫酸按是因为:盐析有效性,pH范围广,溶解度高,溶液散热少,经济.


10. (低温)有机溶剂沉淀法:
强调低温(0-4度以下)是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性,可用乙醇,丙酮等。注意:Mg2+离子,pH值。


11. 聚乙二醇(PEG)沉淀法:
PEG是一个水溶性非离子多聚体,使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性!他溶解是散热低,形成沉淀的平衡时间短,通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀。


相关产品