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EB病毒感染实验室诊断方法与鼻咽癌的关系(简述)

EB病毒是一种重要的感染人类的DNA病毒。EBV是DNA病毒,属疱疹病毒γ亚科,与单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和Ⅱ型(HSV-2)、巨细胞病毒(CMV)、水痘-带疱疹病毒(VZV)和近年发现的人类第6型疱疹病毒同属人类疱疹病毒组,相互间在形态上难以区分,增殖方式也类似。与EBV感染有关的疾病很多,特别 是与鼻咽癌有密切关系。  在我国,几乎所有四岁以上的人群均已感染过EBV,80%以上的健康成人是EBV携带者。特别在珠江三角洲及香港地区,是世界上NPC的高发区。根据中山 市的NPC统计资料,NPC的年龄性别校正的发病率为18.12/10万(男:25.60 /10万;女:11.05/10万)。97%的NPC为非角化性癌。其中主要是未分化癌, 约占90%; 还有少数是分化型非角化性癌,约占10%。几乎100%的鼻咽非角化性癌均有EBV感染。1997年世界卫生组织的国际抗癌联盟年会上把EBV归类为第一 类致癌物。

随着近代分子生物学的发展,对EBV感染的诊断,从原理到方法都得到了突飞猛进的发展。对病原的测定,由于操作要求高、设备及试剂 昂贵等,应用受到限制,因此EBV感染的免疫血清学检测是目前NPC筛查最常用的手段。NPC的早期诊断与临床分期对放疗的疗效意义重大,病期越早,疗效 越高;病期越晚,疗效越低。

EBV感染B淋巴细胞分为潜伏感染和溶解性感染两种,潜伏感染有三型,各型感染都表达EBNA1抗原,所以选用EBNA1抗原免疫应答产生的各类抗体作为EBV感染的血清学指标最有代表意义。与EBV感染相关的疾病很多。重要的有:传染性单核细胞增多症、NPC和鼻咽以外 (例如肺、腮腺、鼻腔鼻窦、扁桃体、胃等处) 的淋巴上皮瘤样癌、鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤 、淋巴瘤样肉芽肿病、Burkitt 淋巴瘤、一些肠病型T细胞淋巴瘤、一些经典Hodgkin淋巴瘤、一些外周T细胞和B细胞淋巴瘤以及器官移植后的淋巴组织增生症(PTLD),等等。EBV感染B淋巴细胞分为潜伏感染(latent infection)和溶解性感染(lytic infection)二种。潜伏感染有三型,Ⅰ型潜伏感染表达EBNA1抗原,病征为Burkitt 淋巴瘤(BL);Ⅱ型潜伏感染主要表达EBNA1抗原和LMP1、LMP2A、LMP2B抗原,病征为NPC和Hodgkin淋巴瘤,研究表明LMP1抗原很可能是诱发肿瘤(Tumour)的主要因素,但由于LMP1在血清中产生的抗体含量低,较难检测,因此不选用它作为血清学指标;Ⅲ型潜伏感染主要表达EBNA1、EBNA2、EBNA3、EBNA4、EBNA5、EBNA6 六种核抗原,病征为PTLD。由此可见,选用EBNA1抗原免疫应答产生的各类抗体作为EBV潜伏感染的血清学指标最有代表意义。

由于鼻咽癌的主要表现是EBV潜伏感染伴有小量的溶解性感染(约15%~20%),溶解性感染出现三个时相,首先表达立即早期抗原(Zebra);接着表 达早期抗原;最后,淋巴细胞的核膜破裂,合成表达了衣壳抗原(VCA)及膜抗原(MA),这一过程有部分会出现流产,不产生衣壳抗原及膜抗原。释放出来的 EBV合成完整的病毒颗粒后又吸附和侵入B淋巴细胞及其他细胞,在这一转化过程中病毒基因组被扩大。由此可见,传统上选用VCA或MA抗原免疫应答产生的 各类抗体作为EB病毒感染筛查试验指标有一定缺陷,而选用Zcbra抗原免疫应答产生的各类抗体可作为EBV从潜伏期感染到溶解性感染转折点的血清学指标 优于VCA。

NPC的显著特征是病人血清中的EBV抗体(尤其是IgA亚型)水平普遍升高,借此可区分NPC与健康携带者。这种变化在NPC发病前期将先于症状出现,这一血清学特点不仅可用于NPC诊断,而且可作为早期发现癌症的有效手段。

EBV感染的免疫血清学检测是NPC早期诊断的常用手段。其目的有两种,第一,评估患者是否有患鼻咽癌的机会,因为鼻咽癌的症状无特异性,只有少数有症状的患者在后来被发现患有鼻咽癌,血清学检测的阳性结果可以指导随访的进行,并提示继续进行组织病理学检查确诊;第二,血清学检测的阴性结果可用于鼻咽癌排除,提示进行另外的检查方案,以发现患者的其它的病因。此外, EBV血清学体外诊断也常用于高危人群的筛选和风险评估。

由于NPC主要表现是EBV潜伏感染伴少量溶解性感染,传统VCA 和EA免疫荧光法或免疫酶法(选用溶解性感染的表达抗原)针对性不强,而且结果判断欠客观性;研究表明:EBNA 1 IgA ELISA和 zta IgG ELISA联合检测时,比传统方法的VCA-IgA 具有更高的特异性,其综合性能超过VCA-IgA和EA-IgA联合检测时的相应预测值。而新一代的EBV 酶联免疫吸附法试剂盒将EBNA 1 IgA、EBNA 1 IgGELISA和zta IgG ELISA结合在一起联合检测效果更佳,可克服传统方法存在的不足,为NPC的早期发现、早期诊断、早期治疗提供有力的手 段。

注:不同EBV血清学检测方法在NPC的体外诊断中的应用(见下表)。

使用范围

目的

抗体检测

NPC早期诊断

高危人群筛查

VCA IgA、EBNA1 IgA

NPC早期诊断

风险水平评估

EBNA1 IgA & IgG、zta IgA& IgG

疑似NPC诊断

NPC预测

EA IgA, EBNA1 IgA ,zta IgA& IgG

疑似NPC诊断

NPC排除

VCA IgA EBNA1 IgA ,zta IgA& IgG

 


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